1.保留值與分離度重現(xiàn)性不好原因分析

問題                                  原因                                   表現(xiàn)
 
不同色譜柱間差異         填料、鍵合相不同           保留因子（k），分離因子（α）

使用期間柱變化             柱床破壞                            柱效（N）

                    鍵合相丟失                        保留因子（k），分離子（α）

                    硅膠基質(zhì)溶解                    柱效（N）

                    強(qiáng)保留分堆積堵塞            保留因子（k），柱效（N）
 
柱外效應(yīng)                         系統(tǒng)差異，進(jìn)樣量大、   柱效（N）

                    進(jìn)樣閥與   色譜柱之間、

                    色譜柱與檢測器之間管

                    路太長、檢測器流通池

                    體積大、接頭死體積大

                    等。
 
分離效果變差                 流動相組分改變               保留因子（k），柱效變化很小 

                    流速改變                           保留因子（k），分離因子（α）

                    溫度改變                           保留因子（k），柱效變化很小
 
柱平衡慢                        重新平衡時(shí)間不夠            保留因子（k），柱效變化很小
 
柱超載                            樣品量太大                        保留因子（k），柱效（N）
 

2.造成色譜峰（不對稱）拖尾的原因

1.色譜柱本身填裝問題，篩板堵塞或填料塌陷；

2.柱頭有污染；

3樣品超載；

4樣品溶劑不合適；

5.柱外效應(yīng)；

6化學(xué)或二次保留（硅羥基）效應(yīng)；

7緩沖容量不足或不合適；

8重金屬污染。

3.如何解決峰形拖尾的問題

A．與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題

1．流動相中，加入30mM的三乙胺（用與堿性化合物）或醋酸胺（用與酸性化合物），未

知化合物加醋酸三乙胺；

2．如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；

3．降低進(jìn)樣量至<1ug。

 
B．與色譜柱有關(guān)的拖尾問題

1．如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚，反相柱可用20倍柱體積的96%的二碌甲烷與4%甲

醇，加1%氫氧化銨混合液沖洗，正向柱可用甲醇沖洗。

2．使用保護(hù)柱

C．與HPLC 系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬

1．進(jìn)樣體積過大，（通?！?5uL）；

2．進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（*佳連接管應(yīng)<20cm，內(nèi)徑為0.007″）；

3．檢測器流通池的體積過大。

4．如何儲存色譜柱

1．防止緩沖溶液和水溶液流動相產(chǎn)生微生物，做到流動相用多少配多少，或在水流動相中加200ppm的疊氮鈉以抑制**成長（一定當(dāng)心其毒性和潛在的爆炸性）；或在流動相中加20%的有機(jī)改性劑，也可抑制微生物生長，有機(jī)改性劑還有助于流動相脫氣。

2．盡可能將色譜柱貯存于100%有機(jī)溶劑（乙晴*好）中，避免在緩沖溶液中保存。

3．使用緩沖溶液后的色譜柱，應(yīng)用15～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機(jī)溶劑流動相沖洗色譜柱，后換成100%有機(jī)溶劑儲存。

4．避免用純凈水沖洗鍵合致密的C18柱。

5．將色譜柱的兩端用堵頭擰好，以免柱床填料干裂。

如何選擇保護(hù)柱

   怎樣選擇保護(hù)柱，但又不能影響分離分析？這是色譜工作者經(jīng)常提出的一個(gè)問題。通常，在選擇保護(hù)柱之前首先要考慮的是樣品是否清潔。對于大部分分析工作者來說，一只1cm長的保護(hù)柱，那么就應(yīng)選擇2cm或3cm長的保護(hù)柱。保護(hù)柱越長，自然所裝填的色譜填料就越多，則其越能避免污染物進(jìn)入分析色譜柱的機(jī)會。當(dāng)然，隨著保護(hù)柱的長度加長，樣品的保留時(shí)間會比使用短保護(hù)柱長。一般來說，保護(hù)柱的內(nèi)徑與分析色譜柱的內(nèi)徑相同或相當(dāng)即可。
 

保護(hù)柱的填料裝填方式也很重要。目前有薄膜裝填法的保護(hù)柱，使用過程很簡單方便，而且可以在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行干裝。但是，其*大的缺點(diǎn)是不經(jīng)濟(jì)，特別是針對中國的具體情況，一次性使用相對費(fèi)用較高。另外，薄膜裝填法的保護(hù)柱所裝填的色譜填料有限，只能提供有限的保護(hù)作用；不過也因?yàn)樗b填的色譜料較少，保護(hù)柱的長度也較短，所以對分析樣品的保留時(shí)間的影響也很小。

另一種保護(hù)柱結(jié)構(gòu)其實(shí)質(zhì)是縮短了的色譜分析拄，設(shè)計(jì)方式上有直連式、手緊式或整體式。整體式設(shè)計(jì)是由色譜的生產(chǎn)廠商直接安裝在色譜分析柱上的，必須與色譜分析柱一同訂貨，可以非常方便地使用，但不能夠被修改。直連式結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)可在任何時(shí)候有色譜工作者來安裝連接，可以與任何品牌的色譜分析柱連接使用，而且還可以根據(jù)樣品的相關(guān)情況選擇不同的保護(hù)柱長度。手上緊即可。另外從保護(hù)柱結(jié)構(gòu)又分為是否可以更換保護(hù)柱柱芯?？梢越档捅Ｗo(hù)柱的使用成本。

大多數(shù)人是根據(jù)色譜分析柱的填料選擇保護(hù)柱的填料，正常情況下可以選擇與分析色譜柱一樣的色譜填料。但是，根據(jù)實(shí)際的分析工作，也可不必與分析色譜柱的填料完全相匹配。

對于選擇保護(hù)柱的原則是：在滿足分析分離要求的前提條件下，盡可能的選擇較短的保護(hù)柱結(jié)構(gòu)，盡可能選擇對分離樣品小一些保留性的填料。

如何解決色譜柱使用過程中出現(xiàn)的問題及保護(hù)色譜柱